Age of Empires III: Definitive Edition ยังให้คุณสวมบทชนพื้นเมืองแก้แค้นเจ้า
อาณานิคมที่เข้ามาหากอบโกยผลประโยชน์และฆ่าล้างเผ่าพันธุ์ หรือสวมบท
จักรวรรดิโบราณเพื่อกู้ศักดิ์ศรีอายุนับร้อยนับพันปีคืนจากพวกชาติตะวันตก
โดยฝ่ายชนพื้นเมืองและจักรวรรดิพื้นเมืองในเกมนี้มีให้เลือก 7 ฝ่าย ได้แก่ แอซเท็ก (Aztecs), โฮดีโนโชนี หรืออิโรควอย (Haudenosaunee หรือ Iroquois),
ลาโคตา (Lakota), อินคา (Incas), จีน, อินเดีย, และญี่ปุ่น แต่ละฝ่ายมีระบบ
เศรษฐกิจ ยูนิต และสิ่งก่อสร้างแตกต่างกัน สร้างสีสันและวิธีเล่นอันหลากหลาย เช่น ฝ่ายโฮดีโนโชนีสามารถสร้างอาคารเกือบทุกชนิดโดยไม่ใช่ทรัพยากรใด ฝ่าย
อินคามีบ้านคานชา (Kancha House) ซึ่งมีความจุสูงกว่าบ้านของฝ่ายอื่นในเกม
และผลิตอาหารให้ผู้เล่นโดยอัตโนมัติ ขณะที่อินเดียเป็นฝ่ายเดียวในเกมที่ได้ค่า
ประสบการณ์โดยอัตโนมัติเมื่อครอบครองปศุสัตว์ในเกม