เมื่อเตรียมการพร้อมแล้ว ดาริอุสเลยยกทัพครั้งใหม่เพื่อไปสั่งสอนความเหิมเกริมของเอเธนส์ (รวมถึงสปาร์ตา) โดยมีการเกณฑ์คนมาจากดินแดนต่างๆ ทั้งจากอินเดีย เมโสโปเตเมีย ตะวันออกกลาง อียิปต์ และเอธิโอเปีย ซึ่งทำให้ทัพของเปอร์เซียในครั้งนี้มีขนาดใหญ่มาก คาดการณ์ว่ามีทหารกว่า 300,000 คน รวมถึงเรือกว่า 600 ลำ